pcr实验室管理制度及流程

PCR实验室管理制度

1.0目的

建立PCR实验室的工作规范，确保分子诊断室正常工作。

2.0范围

PCR实验室，包括试剂准备间、标本制备间、扩增间的使用及管理。

3.0职责

PCR实验室的工作人员必须遵守本文件的规定。

4.0内容

4.1在进入实验室前，在隔离台戴好头套口罩，穿上鞋套与实验服。

4.2试剂准备间

4.2.1配电房先打开风机（先开送风机，再开排风机），再把空调系统打开。关闭时的顺序相反。

4.2.2其它室的用品不得带入本室。

4.2.3从PCR实验室1号入口门进入实验室，到达试剂准备间的缓冲间，脱下白色工作服，挂在缓冲间的左侧，在缓冲间的右侧更换试剂准备间的专用工作服（蓝色），进入试剂准备间，实验中须戴一次性手套，手套常更换。

4.2.4打开已灭菌的超净台，通风一段时间，排走臭氧。取出当次实验需配制和使用的试剂，其余试剂要立即收好放回冰箱内。

4.2.5操作应在冰上进行。Taq酶尽量在配液的最后一步加入。应减少dNTP反复冻融的次数。每次实验后将枪调至最大量程。加模板前打开废液缸盖，加完模板后务必盖上废液缸的盖子。

4.2.6实验作业完成时，应及时清理工作台，做好实验登记，应使用本室专用的记录本和笔，打开超净台的紫外灯旋钮到20分钟处。使用过的离心管、吸头须置于3%的HCl溶液中浸泡、消毒后方可弃之。

4.2.7打开传递窗门，垫上一次性手套，将配好的试剂放到传递窗里，关上传递窗门。

4.2.8在试剂缓冲间脱下工作服，穿上白色工作服。

4.3标本制备间

4.3.1在标本制备间的缓冲间，脱下白色工作服，换上标本制备间专用的工作服（粉红色），进入标本制备间。

4.3.2打开传递窗的门，取出配好的试剂，使用本区专用的加样器和带滤芯枪头。

4.3.3实验作业完成时，应及时清理工作台，使用过的离心管、带滤芯枪头须置于3%的HCl溶液中浸泡、消毒后方可弃之。

4.3.4做好实验登记，应使用本室专用的记录本和笔，打开超净台的紫外灯旋钮到20分钟处。

4.3.5打开传递窗门，垫上一次性手套，将配好的试剂放到传递窗里，关上传递窗门。

4.3.6提取基因组模板，提取过程中丢弃的枪头、离心管和废液请丢弃在此垃圾袋并于实验结束后立即将垃圾袋扎口丢弃。提取质粒可先提取野生型质粒再提取突变型质粒。每次提取工作完成后擦拭台面。

4.3.7在试剂缓冲间脱下工作服，穿上白色工作服。

4.4扩增间

4.4.1在扩增间的缓冲间，脱下白色工作服，换上扩增间专用工作服（绿色）。

4.4.2打开传递窗门，取出配好的试剂，关上传递窗门。

4.4.3打开PCR仪预热20min。

4.4.4将反应管放入PCR仪中，关好门。

4.4.5脱掉手套，设定程序，并命名。

4.4.6结束后需待仪器冷却后方可取出PCR仪里的试剂，取出时用镊子将试剂条夹出，注意勿要使管盖打开，用三个PE手套包好方可弃之。机器上不允许存放PCR扩增产物，每次实验后请自行及时清理PCR扩增产物。

4.4.7结束实验后，到配电房先把空调系统关掉，再关掉排风机，之后关掉送风机。

4.4.8文件的处理：当天所做的实验结果，当天拷到部门电脑上处理，复制一份将文件名改为记录本上的命名。可将试验结果导到PPT上，并标记。

4.5传递窗的使用

4.5.1传递窗每天早上灭菌20分钟一次。当天使用可不用再次灭菌。将试剂放到传递窗时，在底下垫上一层手套。

4.6压力监控

4.6.1每天早上空调运行半小时后，记录各PCR实验室的压力差：试剂准备间：5～10；标本制备间： -5～-10；扩增间：＜-10。 各缓冲间的压力为+5.

4.7超净台的摆放

4.8实验室卫生管理

4.8.1禁止非工作人员进入实验室；参观实验室等特殊情况须在实验室管理员协助下进行。

4.8.2实验室内各工作人员应有个人防护意识，进入实验室时应更换工作服和鞋子，穿着整洁，不留长指甲，不佩戴首饰，长发应束于脑后；禁止在工作区饮食、吸烟、处理隐形眼镜、化妆及储存食物；禁止将个人物品带入实验室；实验室内应避免手→口，手→眼，手→鼻接触，以防止间接感染。

4.8.3实验结束后仍需保留使用的物质，应移入具塞的容器中，并做好标识标签，并写清楚名称、浓度、配制日期、储存温度、有效期和配制人，并放置于相应保存条件下；勿置室温过夜。

4.8.4每天配制使用浓度的消毒液，放于固定地点，用于污染时消毒用，应定期更换消毒液品种。

4.8.5每天上班8点45分先关实验室紫外灯，然后开启风扇，打开实验室走廊窗户。每天9点前每间负责人填写冰箱温湿度记录表。

4.8.6下午4点45分每间负责人填写实验室及冰箱温湿度记录表，清理实验室卫生，检查实验室垃圾及废液缸枪尖，生物垃圾放置于生物安全垃圾桶内，通知专门的垃圾转运车进行清除。在生物安全垃圾桶周边喷洒84消毒液（按1:9或者1:10比例配制）。

4.8.7每日卫生打扫完后，在实验室内喷洒84消毒液，喷洒完，待20分钟过后，对实验室仪器表面及实验台面要用干布擦拭一遍，再用清水清洗一遍，防止仪器被腐蚀。MX3000P仪器反应孔用75%酒精棉球擦拭，擦拭完后用清水擦拭。

4.8.8关闭风扇，开启紫外灯，过夜。关闭实验室走廊窗户，喷洒84消毒液。

4.8.9第一、二间实验室的3%盐酸在实验室内配制，由当周值日人员负责。

4.8.10实验服的清洗时间为每月的1、2、3、15、16、17日，1、15日洗第一间实验服，2、16日洗第二间实验服，3、17日洗第三间实验服，遇节假日顺延。

4.8.11每周对回风口过滤网进行清洗，由当周值日人员负责。

4.8.12如遇加班，以上由加班人员负责；若有请假，请假人员需与其他人员协商调整，否则视为未执行。

4.8.13以上执行情况每天都应填写记录表，并由专人检查确认签字。

5.0注意事项

5.1.1PCR实验室各室使用、进入及单一流向制度，请各位技术员不要贪方便，严格按照规程操作，以免造成严重后果。

5.1.2dNTP的使用：dNTP每周更换一次，每周一做实验时，取已分装好的，周五时丢弃。

5.1.3每位技术员使用自己独立的配液盒。

5.1.4进入各室时请关好门。

5.1.5废液缸中的枪头满到3/4时，要及时倒到自封袋中。

5.1.6缓冲间的内外两个门不能同时开启。