PCR实验室建设施工

PCR全称为聚合酶链式反应，PCR实验室又称基因扩增实验室，特点就是可以把微量的DNA大幅度增加，通过DNA基因追踪系统，能迅速掌握患者体内的病毒含量，其精确度高达纳米级别，精确检测乙肝病毒在患者体内存在的数量、是否复制、是否传染、传染性有多强、是否必要服药、肝功能有否异常改变能及时判断病人最适合使用哪类抗病毒药物、判断药物疗效如何、给临床治疗提供了可靠的检验依据。PCR是分子生物学研究和实验的常规方法，应用于生物学和医学的各个领域。PCR实验室内工作人员必须参加由国家卫生部或各省临床检验中心举办的临床基因扩增培训班，并持证上岗。PCR实验室通过验收，实验室至少必须应有两个以上持有“临床基因检测上岗证”。

规划要点

1、试剂配制室及样品处理室宜呈微正压，以防外界含核酸气溶胶的空气进入，造成污染；可以通过控制进风风量大于排风风量达到正压效果。
2、核酸扩增室及产物分析室应呈微负压，以防含核酸的气溶胶扩散出去污染试剂与样品，可以通过控制排风风量大于进风风量达到负压效果。
3、各个区域之间应具备单向的实验工艺流、物流、人流与气流，形成单向流程的保护屏障，避免实验之间的相互干扰，防止核酸气溶胶对实验过程造成污染产生假性结果。
4、实验室的墙体，顶棚，应结构牢固、气密性好；所有阴角宜采用圆弧形线条过渡；墙体内壁光洁、不吸附、耐腐蚀、易清洗消毒；地面应满足无缝隙、无渗漏、光洁、耐腐蚀要求。

服务流程

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检测项目

• 染色体分析
• 生化检测
• DNA分析
• 诊断性检测
• 基因检测

基本内容

功能作用

能够对患者病情进行科学、准确、实时的掌控，并结合抗HBV与T细胞免疫来打破免疫耐受，阻断肝病病毒复制的疗法、有效的分解肝炎病毒，解决了乙肝病毒易变异、耐药，病毒复制模板难以治疗，人体免疫耐受状态不易打破等医学难题，能迅速消除临床症状，而且有效抑制乙肝病毒复制，明显加快e抗原、抗体的血清转换速度，杀灭血液及肝细胞内的病毒，为防止再感染提供了长期保护，有效阻断和逆转肝纤维化、肝硬化进程。

建立方法

1、建立样品准备区

这个区域专门用作样品的准备，在制备和操作用于核酸提取的试剂时应该采取预防措施：

（1）PCR产物和带有要扩增序列的DNA克隆不能在这个房间操作。

（2）组织培养物、组织标本和血清样品都带进样品准备间处理，以根据应用的需要提取DNA或RNA。

（3）用于样品处理的工具不能被用作普通分子克隆的工具，也不能用作操作靶序列。

（4）DNA样品应该用有专门的防护或正压活塞式移液管操作，以防止在吸取样品时有气溶胶遗留。

（5）大体积样品应该用单独包装的无菌一次性移液管吸取。

（6）管子打开前都要简短离心以减少气溶胶的产生，而且管子不能用力崩开，这样会产生气溶胶。

（7）任何时候都应该穿实验服和带手套，手套要经常更换，尤其在抽提过程中每一步之间都要更换。实验服要专门用于样品准备间，经常清洗。

2、样品准备和RNA-PCR RNA-PCR的额外步骤需要额外的样品操作，这样增加了样品之间污染的机会。为了避免这一问题，反转录一步可以在样品准备区进行。在RNA-PCR中应用UNG以防止污染的方法也有报道。

3、建立前PCR区

该去专门用于准备各种反应，这个区域必须保持干净，而且没有来自克隆和样品准备的污染。前PCR区必须要有试剂和准备，特别是专门用于前PCR区的正压活塞式移液管。

4、PCR实验室试剂的操作

（1）所用的所有溶液都应该没有核酸和（或）核酸酶（DNase和RNase）污染。

（2）所有PCR试剂中使用的水都应该是高质量的－新鲜蒸馏的去离子水，用0.22μm过滤的，并且是高压灭菌。

（3）在20℃到25℃贮存的试剂建议加点像叠氮钠一类的抗微生物剂，在扩增试剂或样品制备试剂中加入0.025%的叠氮钠不抑制扩增反应。

（4）所用试剂都应该以大体积配制，实验一下看试剂是否满意，然后分装成仅够一次使用的量进行贮存。

（5）所有试剂和样品准备过程中都要使用一次性灭菌的瓶子和管子。

（6）新配制的试剂在用于准备新的标本之前应该加以检验。

（7）样品准备和前PCR区所使用的移液管在不使用时都应该小心保存。

5、在前PCR区建立PCR混合物

（1）可以把即刻可用的“主混合物”溶液配好、分装并保存在-20℃或4℃，在实验室只涉及到扩增一种或少数几种特异序列时这样做很有用。

（2）如果你的实验室使用多套引物，以致于配制包括所有试剂的单一反应混合物不够经济，可以考虑分装保存够一天的PCR成分。

（3）作为一个规则，应该保存一套阴性、弱阳性和强阳性对照样品来分析样品配制和PCR前过程的效率和洁净程度。而且，你也希望通过使用一个已知的弱阳性样品来验证你的样品缓冲液以证明里面不含扩增抑制物。

（4）阴性样品要与每组样品同时做，以分析是否存在样品与样品之间的污染以及是否存在PCR产物的污染，阴性对照应该包括核酸以外的所有试剂。

（5）当做阳性对照时，有两个理由决定了应该使用最少数量的核酸。

（6）由于必须有对照反应，对照模板的特点应该予以考虑。

6、控制污染的方法

已设计出很有力的酶学方法用来消除一种形式的污染—使用UNG，这一技术能有效地消除由PCR产物引起的污染。另一种控制污染的方法是使用紫外线，这种方法不能完全消除污染问题，但可以将污染降低几个数量级。

7、后PCR区PCR完成以后，需要分析样品并解释数据，应该留出一个专门用于反应后处理样品的地方。后PCR活动中使用的所用试剂、一次性耗材和仪器都必须是专门用于这一目的，决不能把实验室这一区域的试剂或仪器用于任何前PCR活动

设计内容

• 基因检测实验室装修设计图
• 基因检测实验室家具设计图
• 基因检测实验室仪器布置图
• 基因检测实验室平面规划图
• 基因检测实验室气路设计图
• 基因检测实验室水电设计图
• 基因检测实验室暖通设计图
• 基因检测实验室洁净系统图

施工内容

• 实验室环保消防系统施工
• 实验室排风通风施工
• 实验室电气系统施工
• 实验室主体工程施工
• 实验室集中供气施工
• 实验室自动化系统施工
• 实验室给排水管施工
• 实验室三废处理工程施工

仪器配套

• 紫外荧光硫含量测定仪
• 液体石油产品烃类测定仪
• 润滑脂和石油脂锥入度测定仪
• 库仑法硫含量测定仪
• 全自动闭口闪点测定仪
• 恩格拉粘度测定仪
• 柴油检测仪器
• 原油水含量测定仪（双联）
• 抗乳化性能测定仪
• 全目动酸值测定仪

标准规范

• 《采暖通风与空气调节设计规范》GB50019（2003）
• 《实验室通用安全准则》WS233-2002
• 《建筑给水排水及采暖工程施工质量验收规范》GB50242-2000
• 《实验室建筑技术规范》GB/T50346-2004
• 《民用建筑电气设计规范》JGJ16-2008
• 《实验室施工及验收规范》GJ71-1990
• 《建筑给排水设计规范》GB50015-2003
• 《实验室建设设计规范》GB/T50073-2001
• 《建筑电气工程施工质量验收规范》GB50303-2002
• 《暖通空调制图标准》GB/T50114-2001
• 《实验室技术要求验收规范》GB/T37140-2018
• 《通风与空调工程施工质量验收规范》GB50243-2002